本試劑盒適合提取1-5 ml菌液,在堿裂解法裂解細胞的基礎(chǔ)上,采用獨特的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)和試劑配方,通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下高效專一的結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,每個吸附柱最高可吸附30 μg的質(zhì)粒DNA,并最大限度的去除蛋白質(zhì)、基因組、RNA和其他雜質(zhì)。得到的質(zhì)粒DNA可直接用于細胞轉(zhuǎn)染、PCR、酶切、測序、連接等生物學(xué)實驗。
Q1:得率低
A1:菌體中無質(zhì)粒(需確認質(zhì)粒未被污染,并確認質(zhì)?截悢(shù)是不是低拷貝質(zhì)粒,菌液體積小提為1-5 ml,中提為5-15 ml,大提100-300 ml),菌液體積要適當。
A2:大腸桿菌老化(一般甘油保存菌株,需活化后重新培養(yǎng)搖菌進行提。;4°C保存菌液時間過長,建議使用新鮮菌液。
A3:溶液使用不當:使用前若發(fā)現(xiàn)Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀,需在37℃水浴幾分鐘,恢復(fù)澄清后使用。
A4:操作不當:加入洗脫液時,未垂直懸空加入柱膜中間洗脫質(zhì)粒;加入洗脫液EB后未靜止2分鐘直接洗脫。
Q2:純度低
A1:有RNA污染(需確認RNase A是否加入Buffer P1中,加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃保存6個月有效。)
A2:對于含有大量核酸酶的宿主菌,建議用含有去蛋白液的提取試劑盒。(高純質(zhì)粒提取試劑盒CW0500)
A3:Buffer PW中使用前是否按要求加入無水乙醇。
A4:質(zhì)粒點樣飄出孔,PW洗滌后晾干2-5分鐘徹底去除無水乙醇的殘留。
A5:有基因組污染:加入溶液P1、P2后,混勻不要太劇烈,溫和地上下顛倒混勻4-6次。